時間:2023-03-17 18:06:01
序論:寫作是一種深度的自我表達。它要求我們深入探索自己的思想和情感,挖掘那些隱藏在內心深處的真相,好投稿為您帶來了七篇醫學技術論文范文,愿它們成為您寫作過程中的靈感催化劑,助力您的創作。
優勢和特點
1)親和力高、特異性強。適配體與靶標之間,憑借彼此互補的三維結構,相互作用后形成牢固穩定的復合物,其解離常數通常能達到pmol/L~nmol/L的水平,并且能分辨出靶標結構上細微的差別。
2)庫容量大,識別范圍廣泛。SELEX技術的靶標遠遠多于經典的抗原抗體結合反應,除了有蛋白質、核苷酸分子外,還可以是糖類、氨基酸、維生素、抗生素、金屬離子、有機染料,甚至可以是細菌、病毒、寄生蟲等完整的細胞或組織,幾乎囊括了自然界中的全部物質。
3)合成容易,獲得方便,易于修飾。適配體的體積比傳統抗體小,篩選過程簡便、周期短,對實驗室的要求不高,并具備自動化控制的巨大潛力。經過化學合成和修飾以后可保持原生物活性不變,還可以增強其穩定性并增加其他新的化學性質,參加多類反應。標記了熒光、生物素和納米金顆粒之后,發展出了諸如分子成像技術等疾病診斷新方法。
4)重復性好,純度高。整個篩選和制備的過程在人為控制之下,所得到的適配體幾乎沒有生產批次之間的差異,便于日后的大規模生產和應用。的化學性質更穩定,不易降解,對溫度不敏感,保存時間長,即使變形也能在很短的時間內復性,利于室溫下運輸。
5)分子量小、穩定性高。相對于抗體或酶,適配體的化學性質更穩定,不易降解,對溫度不敏感,保存時間長,即使變形也能在很短的時間內復性,利于室溫下運輸。
6)應用便捷。SELEX技術所獲得的適配體又被稱作是核酸型抗體,其優于傳統抗體的性質是沒有免疫原性,因此便能獲得一些低免疫原性甚至無免疫原性靶分子的適配體。并且還省去了傳統抗體制備過程中的動物實驗,而直接從體外文庫中獲取。而且適配體更容易通過細胞膜,并且沒有毒性,利于檢測細胞內的靶分子和實現多層次的調控,并能較快地被機體清除代謝掉,經過特定的化學修飾后,還可使半衰期延長,穩定性提高,便于科學研究和疾病診治。
2SELEX技術的發展
目前SELEX技術出現了一些新的篩選方法,越來越多的與各種標靶相對應的適配體被篩選出來。如毛細管電泳法、硝酸纖維素膜過濾法、磁珠分離法、親和色譜法、Non-SELEX技術、無引物PCR-SELEX技術、微流體SELEX技術、生物芯片SELEX技術、原子力顯微鏡等各種新的模式也被應用到適配體的篩選中。同時還出現了SELEX技術與定量PCR,SEL-EX技術與流式細胞儀、SELEX技術與ELISA的聯合應用,更是極大的提升了篩選的效率和準確性。
2.1消減SELEX技術消減
SELEX技術是一種經過改良的SELEX技術。以完整細胞為靶標的消減SELEX技術,是在篩選過程中以完整的細胞作為靶標,并消減掉能與已知或未知的共有靶標結合的配體,經過消減后的次級隨機文庫再投入到特異靶標的篩選中。它的意義在于可以實現從兩組高度同源的完整細胞中,篩選出針對其中一種細胞的特異性適配體。這項技術可應用于發現新的腫瘤細胞識別結構,還可進一步作為“生物導彈”,獨立完成靶向治療或攜帶藥物,未來將會在腫瘤的治療中發揮巨大的功效。
2.2自動化SELEX技術
傳統的SELEX技術過程需要完成一套重復繁瑣的操作,使得篩選相對耗時耗力。自動化SELEX技術的建立可以簡化篩選過程,節約時間和物品的消耗,實現高通量和限定范圍,達到同時篩選多個靶分子的效果。自動化SELEX技術離不開現代分離儀器的配合,后者的發展推動了前者的進步。2001年Cox等使用Biomek2000自動化工作站成功篩選到了溶菌酶的特異性適配體,通過這種自動化篩選平臺,不到2d就完成了12輪的篩選。
2.3導向SELEX技術
適配體的特異性是整個SELEX技術的核心所在,為了提高適配體的特異性和穩定性,可將已知的能與靶標非特異結合的分子摻入到文庫中或預先與靶標進行混合后再篩選,這樣可獲得只與靶標特異結合的適配體。2002年Hamm等將此技術與抗個體基因型的方法聯合運用,成功獲得了特定激酶抑制劑的特異性RNA適配體。Martell運用特殊的導向SELEX技術,從隨機表達盒雜交文庫中篩選到了能與E2F蛋白具有高親和性的RNA適配體。
3SELEX技術在醫學中的應用
3.1SELEX技術在基礎醫學研究中的應用
依據核酸適配體具有與靶物質高特異性結合的能力,可以幫助我們尋找到疾病的發病機制。Roulet等提出把SELEX技術同基因表達串行分析手段聯合應用,并通過自動化的序列提取工藝,建立轉錄因子結合位點的定位模型。通過對轉錄因子適配體文庫中的某一序列進行測序,可了解該蛋白結合位點的特異性,探尋一些以前在基因組中從未研究過的結合位點,掌握在不同的核苷酸位點上非獨立堿基出現的先后順序,為闡明其結合機制提供一些線索。Bian-chi等采取SELEX技術發現,TRF1二聚體在端粒上有兩個相同的識別半位點,它們的距離可以變化,且兩個半位點的順序方向沒有區別。這為探索端粒長度的調節機制提供了新依據。
3.2SELEX技術在疾病診斷中的應用
腫瘤細胞及其標志物的早期檢測對于腫瘤的診斷及預后極為重要,目前已經篩選出多種腫瘤的特異性適配體,例如急性髓系白血病的適配體KH1C12、急性淋巴細胞白血病的適配體sgc8/sgc3/sgd3、惡性膠質瘤的適配體GBI-10、Burrkitt淋巴瘤的適配體TD05、非小細胞肺癌的適配體S1/S11e/S15、小細胞肺癌的適配體HCA12/HCC03/HCH07/HCH01、乳腺癌的適配體KMF2-1a、結腸癌的適配體KDED2/KD-ED7/KDED9/KC2D3、小鼠肝癌的適配體TLS9a/TLS11a、卵巢癌的適配體DOV3/DOV4/DOV6。它們可以特異地識別腫瘤細胞,僅需少量腫瘤細胞即可實現準確的鑒別和分型。將適配體與納米顆粒結合后通過比色檢測,觀察顏色的變化即可判斷有無靶標細胞。這個實驗非常敏感,樣本中的靶細胞數超過百個即可檢測出來,還不需要昂貴的檢測設備和待檢靶標的標記與修飾。因此,有可能成為常規篩查活體標本中新生腫瘤細胞的一種新方案。與此同時腫瘤細胞的分子成像技術也已經問世,它能夠從細胞水平對生物過程進行可視化描述及測量,不僅能定位病灶,觀察某些影響腫瘤細胞行為的生物過程,還能觀察腫瘤細胞對藥物的反應。Kim等研究將前列腺特異性膜抗原(PSMA)的特異性適配體與金納米材料結合后,帶有PSMA的前列腺癌細胞便能夠被特異性地標記出來,將其作為造影劑應用在前列腺腫瘤的影像學診斷中,比傳統的造影劑顯像時間更持久,毒副作用更小,應用價值更顯著。SELEX技術還在血液的生化檢查方面,顯示出一定的應用前景。用其檢測血液中的某些靶分子,將比傳統方法更特異和高效。腦尿鈉肽(BNP)常被臨床上用來評價急性心力衰竭或急性呼吸窘迫癥患者的病情和預后。Lin等采用SELEX技術的原理,篩選到了能與BNP特異結合的適配體。在微流體試驗模式下,被熒光標記的適配體可以快速測出血液中BNP的濃度,比放射免疫分析法或是免疫分析技術更精確、更經濟。C反應蛋白(CRP)是機體在應激狀態下生成的一種非特異性的急性時相反應蛋白,CRP與冠狀動脈粥樣硬化、心肌梗死等心血管疾病具相關性。Bini等開發出了一種帶有光化學性質的CRP特異性適配體,當血液中的CRP濃度超0.005mg/L時就能被檢測出來,敏感度非常高。這一成果為新型CRP診斷試劑的研制奠定了基礎。SELEX技術還被應用在病原微生物的檢測,其能克服傳統檢測方法在特異性和敏感性上的缺陷,為新型檢測試劑盒的開發提供有力支持。例如結合分支桿菌的特異性適配體CSRI2.11檢測過程比傳統的培養鑒定法更省時更敏感;丙型肝炎病毒的適配體ZE2可結合酶聯免疫吸附試驗實現丙型肝炎的早期篩查,不受抗體檢測時窗口期的制約;瘧原蟲乳酸脫氫酶的適配體PL1在臨床實踐中,可以很好的區分患者是否感染了出間日瘧原蟲或惡性瘧原蟲。
3.3SELEX技術在疾病治療中的應用
SELEX技術在疾病治療中的功效越來越來受到人們的重視。適配體在體內與靶分子結合,理論上可以對靶分子的生理功能和代謝過程產生影響,靶分子也會因此發生信號傳導的改變甚至喪失原本的功能,直接或間接阻斷疾病發生進程。以此開發的靶蛋白功能阻斷劑,日益顯示出其巨大的潛力。全球首個適配體藥物是2004年由美國食品和藥物管理局批準上市的哌加他尼鈉,可用來治療老年性黃斑變性。SELEX技術在凝血系統疾病的治療上具有一定的意義,已找到了可用作抗凝血和抗血栓藥物的適配體REG-1,其結合的位點是凝血酶的肝素結合位點以及纖維蛋白原結合位點。在治療免疫系統疾病方面,也已獲得了具有藥物開發潛力的特異性適配體,如可用來拮抗自身抗體已達到治療系統性紅斑狼瘡的適配體,還有能刺激T細胞釋放的4-1BB的適配體。對于腫瘤的治療,基于SELEX技術研制的適配體藥物更是走在前列,進入到了臨床試驗階段。如對實體瘤和復發性急性髓樣白血病有良好療效的AS1411,更出現了連接金納米棒的適配體,用作腫瘤靶向光熱治療。適配體藥物作為抗病毒藥,也展現出良好的前景,比如用來抑制狂犬病病毒的復制和干擾艾滋病病毒的體內合成。除此以外,核酸適配體還可作為運輸工具,特異性地把藥物運送至靶標細胞或組織達到定點清除的治療效果,研究比較成熟的有裝載著阿霉素,用來殺傷前列腺癌細胞的復合適配體藥物。
4展望
想挑戰超人類主義所提出的概念,此概念試圖補全那件仍只是半成品的人類改造工程。作為回應,筆者簡單概括了一下《赫西奧德和埃斯庫羅斯》中關于普羅米修斯神話的兩種解釋,它可以幫助我們正確地了解運動醫學的道德局限。以此總結為一條平淡無奇的提示:人類是凡胎俗骨的,面對疾病和死亡的脆弱無助是遠非人類自身可以克服或消除的,這代表了在道德以及普通醫學,特別是運動醫學這兩方面的自然局限。
二、生物醫學技術與體育科學的發展
把現代社會實踐歸結為科學問題很容易,同樣,設想一種特定的科學技術,例如電腦技術來舉個范例也不難。將技術與工具制造聯系在一起,使我們又開始懷念起那些被閑置的工具。“技術”一詞有一個古老的過去,它來源于兩個希臘字技藝和徽標。技藝是指那種技巧——“實用知識”參與決策的事情,而通過標識恐怕只是推理的一種形式,旨在了解其性質或從事物中得到我們所認可的東西,它實際上是由亞里士多德創造出來的,“技術”的意義最初指修辭學的技術技能——標志字面上的技藝。但是,在日常生活中把科學和技術的概念混為一談的做法并不少見。事實上,至少在英國,體育科學家就經常把他們的研究活動和本來該稱作體育技術的事物混為一談。目前,哲學領域的科學家早就明確區分了理論(科學)和應用(技術),但這一區分并沒應用到在對體育的自然研究中。在日常交談中,把科學和技術這兩個概念區分開來是比較困難的。事實上,體育科學家經常把他們的體育項目和確切的應該稱為“運動技術”的概念混為一談。當今的科學哲學家已經可以把理論學(即科學)和應用學(即技術)明確區分開來了,盡管在體育運動的理論科學領域,這兩個概念依舊難以區分。在此可以想象一下,如果醫藥領域和體育科技可以很簡單的獲得運用,通過理論知識到實踐性知識再到設備與材料的步驟,分別得出醫藥和體育的目的。如果以上都可以獲得實現的話,那么他們的顯著特征就應該是一個“目的--結果”的結構。科技就可以被認為是利用目的去得到一個被選擇好的結果。
1.1實踐教學模式陳舊
醫學檢驗技術專業實踐教學一直沿襲“基礎實驗→專業技能訓練→臨床見習→畢業實習”教學模式進行,實踐教學以校內實驗、實訓為主,缺少與行(企)業的聯系與互動。
1.2實驗教學內容滯后
當代醫學檢驗已遠不是一桿槍(刻度吸管)、一門炮(顯微鏡)的時代,取而代之的是操作自動化、技術現代化和方法標準化的時代。然而,由于受到條件的限制,臨床檢驗新設備和新的檢驗技術在臨床應用后,很長一段時間內不能被納入教學內容。
1.3校內實訓基地建設滯后
醫學檢驗技術專業校內實訓基地建設,一直按照課程為基礎設計教學實訓室,通常為生化檢驗實訓室、免疫學檢驗實訓室、微生物學檢驗實訓室、臨床基礎檢驗實訓室和血液學檢驗實訓室等。實訓室功能單一,缺乏醫學檢驗職場氛圍,教學儀器設備更新速度慢,明顯落后于醫院檢驗科。這些都導致學生在進入實習崗位時對自動化儀器的使用及維護不能熟練掌握、融入角色慢等問題。
2檢驗儀器實訓的改革與實踐
2.1開展崗位調研
2010年我們就浙江省各級各類醫院檢驗科大型儀器配置情況以及對檢驗儀器使用與維護重要性的評價開展了調研。調研單位共165家,收回有效調查問卷163份。其中三級醫院55家,二級醫院16家,城市社區衛生服務中心45家,鄉鎮衛生院42家,獨立實驗室5家。
2.1.1大型檢驗儀器配置情況
五分類血細胞分析儀、尿干式化學分析儀、尿沉渣自動分析儀、全自動血凝儀、全自動生化分析儀、血氣分析儀、酶標儀、免疫發光分析儀以及微生物鑒定藥敏分析系統在二級及以上醫院配置情況達80%以上。
2.1.2對檢驗儀器使用與維護重要性的評價
調研結果表明:90%及以上被調查者認為檢驗儀器使用和維護對醫學檢驗技術專業很重要或重要,應作為醫學檢驗技術人員必備的專業技能。
2.2實施過程
根據上述調研結果,結合醫學檢驗技術專業實踐中心現狀,在充分聽取專業建設指導委員會專家意見的基礎上,我們將專業核心課程中有關大型檢驗儀器實訓內容進行整合,確定檢驗儀器實訓內容。將五分類血細胞分析儀、尿干式化學分析儀、尿沉渣自動分析儀、全自動血凝儀、全自動生化分析儀、血氣分析儀、酶標儀、免疫發光分析儀以及微生物鑒定藥敏分析系統作為實訓重點。2011年與杭州5家醫院按照“院中校”的理念建設緊密型校外實訓基地,通過集體備課的形式,共同制訂校外檢驗儀器實訓教學大綱,學方法,通過聯合命卷統一實訓考核評價標準。
2.2.1實訓安排
在第四學期的第15周安排為期一周的校外檢驗儀器實訓。通過一周的校外檢驗儀器實訓,要求學生初步熟悉和了解檢驗常用儀器如血細胞分析儀、尿液分析儀、尿液沉渣儀、全自動血凝儀、全自動生化分析儀、酶標儀、全自動細菌鑒定儀等儀器的工作原理、操作方法、試劑參數、質量控制、維護保養及注意事項等內容。上述教學過程,全部由臨床一線骨干教師通過集中講授、分組示教以及實戰演練等形式完成。校外檢驗儀器實訓總學時為30學時,其中集中講授11學時,分組(6人/組)示教1時。
2.2.2總結及考核
每次實訓結束后,臨床一線教師對檢驗常用儀器的工作原理、操作方法、試劑參數、質量控制、維護保養及注意事項等進行總結。為了更好地了解學生對檢驗儀器實訓內容的掌握情況,以試卷形式完成考核。試卷由5家校外實訓基地聯合命題,其中客觀性試題占75%,主觀性試題占25%。考核內容主要為常用檢驗儀器有關的基本原理和操作方法,如自動生化分析儀常用的分析方法有哪些?尿沉渣分析儀標記參數和定量參數分別有哪些?目前醫院使用的主流血培養儀型號是什么?其檢測原理主要是什么?等等。
3效果
為了解在校學生校外檢驗儀器實訓效果,我們對2012級醫學檢驗技術專業174位學生進行了問卷調查,本次調查共收到有效問卷167份。絕大部分學生肯定了我們的改革,認為校外檢驗儀器實訓內容安排合理,與專業理論非常銜接,對掌握專業理論知識很有幫助;而且通過這次實訓,知道了醫院檢驗科整個檢驗流程,熟悉了一些大型檢驗儀器的操作流程,了解了大型檢驗儀器的維護對檢驗結果的重要性。實訓過程中帶教老師隨時向學生滲透質量控制對檢驗醫學工作的重要意義,這對培養和提高學生的質量意識、誠信意識等專業必備的職業素質都有很大幫助。從2011年開始,醫學檢驗技術專業已經連續4屆(2009級-2012級)22個班級637人參加了校外檢驗實訓,取得了良好的教學效果。學生一進入實習崗位就能很快進入角色,深受實習單位好評。通過近2年畢業生訪談得知,校內所學的專業技能和崗位實際應用比較銜接,能迅速適應崗位要求,因此,這項改革得到了用人單位的肯定。
4小結
在醫學護理中無菌技術的使用要求周圍保持一個清潔寬敞的環境,在進行操作之前半個小時之內應該停止一切清掃活動,并減少除醫護人員之外的一切人員的走動,避免周圍環境塵土飛揚。在操作過程中應該保證操作臺的清潔、無污染,在進行操作之前,要求護士對其進行全面的消毒處理“。
2操作前的準備工作
護士在無菌操作之前,應該將佩戴的各種飾品全部摘除,并對護士的指甲進行全面的檢查消毒處理,按照臨床護理的要求對手進行清洗和消毒,在操作過程中要求護士佩戴口罩。
3使用物品的準備
首先,應該對操作過程中使用的手套的包裝、型號和大小進行全面的檢查,對無菌治療碗包的密封情況進行詳細檢查,查看其是否存在破損和返潮的現象,同時還應該對消毒條進行嚴格的消毒處理,看其是否在有效期內;其次,檢查無菌持物鉗包裝是否存在破損的情況,無菌容器是否存在破損以及返潮的現象;再次,檢查無菌溶液瓶El是否出現了松動的現象,整個瓶身是否存在損壞的情況,然后對容器內溶液的顏色、有無沉淀物、是否有絮狀物以及是否澄清進行全面的檢查,并保證容器內的溶液在有效期內使用;最后,檢查棉簽的使用期限,同時對消毒水的使用期限以及醫用彎盤的清潔和干燥情況進行詳細、全面的檢查,在最大程度上保證操作過程中的無菌環境。
4操作過程
4.1無菌持物鉗的使用方法
使用這種器械的主要目的是為了傳遞無菌材料和器械等,在使用過程中,正確的使用方法是,首先,將無菌鉗包打開,將裝置放置于操作臺上,然后在標簽上標注清楚打開的時間,在有效期內使用;其次,將標簽貼于無菌持物鉗的容器壁外側,使用無菌持物鉗時應該保證前端閉合向下,不能接觸到容器的瓶口,使用完畢之后應該將持物鉗迅速放人容器內,并把密封蓋蓋好。在加持遠距離的無菌物品時,應該連同裝持物鉗的容器一起搬到距離物品較近的距離進行操作,在進行物品加持過程中應該將容器的瓶口蓋緊,避免物品接觸到容器的邊緣。
4.2無菌包的使用方法
在使用無菌包過程中,首先,在打開無菌包過程中,手不能接觸無菌包的內側,用手輕輕的打開無菌包,然后將系帶輕輕的放在操作臺的一側。在無菌包中,無菌治療巾包內消毒指示條碼是變色的。在使用無菌鉗加持這些物品的過程中,無菌包內如果還存在沒有使用的物品時,應該按照原來的包裝重新包裹起來,無菌包系帶都是橫向結扎,其有效期在一天之內,在使用過程中應該將標簽貼于無菌包的外側。
4.3無菌容器的使用方法
在使用無菌容器的過程中,應該用手托住底部,從無菌容器內部加持物品,然后將蓋子全部打開,這個過程中應該注意避免物品容器的邊緣污染容器。物品取出后應該立即將容器的蓋子蓋住,使用過程中無菌容器的使用期限也是一天。
4.4無菌溶液的使用方法
1.1基因擴增技術1983年美國Cetus公司的Mullis發明了聚合酶鏈反應技術(polymerasechainreaction,PCR),該技術利用DNA高溫變性和低溫復性的原理,通過變性、復性和延伸3個溫度變化,成功實現核酸片段的體外擴增。PCR技術以其特異性高、靈敏度高、簡便、快速,對標本的純度要求低等優點,被廣泛應用到醫學、農業、食品檢驗等領域。PCR技術分為兩種:常規PCR技術和實時PCR技術。常規PCR技術,指僅對PCR擴增反應的終點產物進行定性或半定量分析,無法對起始模板準確定量,也無法對擴增反應實時檢測的一項核酸擴增技術,但該技術所需技術平臺和儀器設備較低,花費成本相對也低,目前臨床上主要運用該平臺對定性項目進行檢測,例如:缺失基因、突變基因、融合基因等的檢測。實時PCR技術,又稱實時定量熒光PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的技術。實時PCR技術,具有特異性強、準確度高、重復性好等特點,在檢驗醫學上主要應用于核酸定量、mRNA表達水平分析等,可以分析和指導臨床用藥、監測藥物療效、判斷病情進展。
1.2基因測序技術1977年Maxam提出了化學修飾降解法模型,為核酸測序時代的到來拉開序幕。同年,Sanger等發明了DNA雙脫氧鏈末端終止法,可以檢測物種或細胞的核酸序列,再與基因庫進行比對,從而知道被檢測物種或細胞的特性。Sanger法作為最經典的測序方法,讀取序列長,能夠較好地處理重復序列和多聚體,仍為目前常用的測序方法,廣泛應用于基因組DNA、cDNA等多重復序列的檢測。該技術不足之處:靈敏度較低,通量較低。1998年Ronaghi發明了焦磷酸測序法,其基本原理是利用引物延伸時所釋放的焦磷酸基團激發熒光,通過峰值高低判斷與其匹配的堿基數量。比起Sanger法,提高了靈敏度,在SNP位點檢測、等位基因突變測定等廣泛運用。近幾年,發明了高通量測序技術,是對傳統技術的一次革命性的創新。該技術通過DN段化構建DNA文庫、文庫與載體交聯進行擴增、在載體面上進行邊合成邊測序反應,完成對海量數據的高通量測序。該技術測序速度快、準確度高,可以進行大規模的測序檢測,主要應用于全基因組序列、內含子序列、外顯子序列等的分析和研究。
2分子診斷學技術在檢驗醫學中的應用
分子診斷就是應用分子生物學技術,在遺傳物質的結構或表達水平,通過檢測特定基因存在、轉錄及表達異常,對人體狀態和疾病作出診斷的方法。分子診斷學在檢驗醫學中的應用,使越來越多的疾病的發生發展的分子機制得到闡明,為臨床醫生對疾病的診斷、治療和預后,提供最為直接、最為準確的依據。目前分子診斷學技術在感染性疾病和遺傳性疾病中的應用最為廣泛。
2.1分子診斷學技術在感染性疾病的應用感染性疾病是指外源病原體入侵機體后,生物體無法排除該病原體而產生一系列不適的反應。一般通過病原體培養或血清學方法進行病因查找。酶聯免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)是目前檢驗醫學實驗室檢測免疫學指標應用最廣泛的方法之一,廣泛應用于乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病等感染性疾病的診斷檢測和診斷,具有靈敏度高、特異性強、快速簡便等優點,但是一些影響因素不容小覷,臨床待檢標本常受溶血、黃疸、脂濁等因素的影響,導致檢測結果判斷錯誤。血清學也只能確定機體是否接觸病原體,不判斷是否是現行感染。PCR和基因芯片技術應用于病原微生物的檢測,具有敏感性高、耗時少、效率高等優點。例如:利用實時熒光定量PCR技術檢測乙肝病毒DNA的載量,與傳統的酶聯免疫法相比,既可以提示疾病的嚴重程度,也可以監測藥物療效、預后與復發。分子診斷學技術在感染性疾病的應用,可彌補血清學檢測技術的缺陷,主要包括以下幾個方面:(1)檢查不能培養或生長緩慢的病原微生物;(2)通過病原微生物的定量檢查監測病情;(3)微生物耐藥性的檢查;(4)細菌分型及流行病學調查。
2.2分子診斷學技術在遺傳性疾病中的應用遺傳性疾病是指遺傳因素占主要發病原因的某些疾病,幾乎都存在一定的基因缺失或突變。分子診斷學技術是指通過分析患者體內遺傳物質結構或表達水平的變化,對人體健康狀態和疾病作出或輔助診斷的方法。分子診斷學技術已經能夠診斷已知致病基因的遺傳性疾病,對一些基因突變所致的遺傳病也有良好的診斷意義,也能利用遺傳標志來診斷一些病因未明的疾病。例如,鐮狀細胞貧血:β-珠蛋白基因中第6位密碼子的序列由原來的GAG改變為GTG,編碼的血紅蛋白為鐮狀細胞血紅蛋白。通過PCR技術可以將包含突變位點的β-珠蛋白基因片段擴增,根據產物分析的結果可以對該遺傳性疾病進行診斷。基于基因芯片技術,對基因SNP進行分型,檢測遺傳性耳聾基因,發現50%的兒童期耳聾與遺傳因素有關。采用序列特異性引物聚合酶反應(polymerasechainreac-tionwithsequencespecificprimer,PCR-SSP)技術對白介素18基因啟動子區-607C/A、-137G/C基因型多態性進行分析,從而發現該基因啟動子區-607C/A、-137G/C多態性與江西人群哮喘未見相關性。利用高通量測序技術,結合生物信息學,可以準確預測胎兒發生某些遺傳性疾病的風險,從而達到降低畸形兒出生率的目的,例如:21-三體綜合征(唐氏綜合征)、18-三體綜合征(愛德華綜合征)等。
3現狀和挑戰
分子診斷以PCR為基礎,自從發明以來,廣泛地應用于疾病診斷、療效檢測和預后判斷,有力推動了檢驗醫學的發展,開辟了檢驗醫學的新領域,給檢驗醫學帶來機遇與挑戰。在美國和歐洲等發達國家,分子診斷已經成為了醫療診斷不可或缺的重要組成部分,為人民的健康保駕護航發揮重要的作用。國內的分子診斷學技術在檢驗醫學中的應用,雖取得一定程度的發展,但是始終落后臨床的發展,難以滿足臨床診斷的要求,分子診斷項目開展較少,重視程度不夠,應用緩慢。以下從兩方面分析我國分子診斷學技術應用于檢驗醫學的現狀及存在的問題。
3.1分子診斷檢測平臺現在檢驗醫學的發展方向是自動化和一體化,分子診斷學技術努力實現檢測儀器、試劑和校準品的一體化,從而避免實驗室之間結果的差異。我國的分子診斷在檢驗醫學中的應用平臺,還處在起步階段,實現自動化尚需時日。目前我國在核酸提取、擴增反應系統準備、擴增前加樣、上機、產物和結果分析等方面仍是以手工操作為主。歐美國家基本上采用自動化核酸提取系統,既可以提高工作效率,減少生物暴露時間,還避免操作人員個體差異對實驗結果的影響,提高結果的可重復性和準確性。目前我國應用于檢驗醫學的主流分子診斷學技術是實時熒光PCR技術,主要用于感染性疾病病原體核酸的檢測,而歐美發達國家,檢測平臺較為多樣,主流技術為測序,分子診斷涵蓋了感染性疾病、遺傳性疾病、腫瘤等領域。
3.2技術人員的水平與能力分子診斷檢驗項目質量控制涵蓋多個方面,包括分析前、分析中、分析后的各個層面,因此對技術人員、儀器、標本、環境要求更加嚴格。目前我國對分子診斷學技術人員的培訓尚不到位,技術人員在實驗操作、結果報告、臨床咨詢方面尚有很多不足之處。隨著人們對人類基因組功能研究的深入,人們對生命、疾病、衰老、死亡的認識更深。分子診斷涉及個體的基因差異,要求相關技術人員能夠提出專業的意見,指導預防疾病、降低患病風險,以及實現個性化治療等,這就對從事分子診斷學技術的工作人員的水平和素質提出更高的要求。
4前景和展望
1醫學論文的基本要求
1.1創新性醫學論文的創新性是指文章要有新意,要發展醫學成就,破解醫學問題。醫學論文有無創新,選題是關鍵。選題創新是醫學論文寫作的靈魂,是衡量醫學論文價值的重要標準。可體現在:①理論方面的選題應有創新見解,既要反映作者在某些理論方面的獨創見解,又要提出這些見解的依據;②應用方面的選題應有創新技術等,也就是要寫出新發明、新技術、新產品、新設備的關鍵,或揭示原有技術移植到新的醫學領域中的效果;③創新性還包括研究方法方面的改進或突破。
1.2可行性所謂選題的可行性,是指能夠充分發揮作者的綜合條件和可以勝任及如期完成醫學論文寫作的把握程度。選題切忌好高鶩遠,脫離實際,但也不應過低,影響主客觀的正常發揮,降低了醫學論文的水平。影響選題的可行性因素有:①主觀條件,包括作者知識素質結構、研究能力、技術水平及特長和興趣等;②客觀條件,包括經費、資料、時間、設備等。
1.3實用性撰寫醫學論文的目的是為了交流及應用。要從實際出發,選擇夠指導科研、指導臨床、造福人類的主題,因此,選題的實用性尤為重要。
1.4科學性醫學論文是臨床和醫學科學研究工作的客觀反映,其寫作的具體內容應該是取材客觀真實、主題揭示本質、科研設計合理、論證科學嚴謹、表達邏輯性強、經過實踐檢驗。所以,嚴格遵守選題的科學性原則,是醫學論文寫作的生命。
1.5前瞻性要選擇有研究價值及發展前途的主題,應積極開發研究新領域、新學科和新理論。
2選題的基本方法
2.1根據課題研究的結論來確定主題這是常用的方法,可分為:①以科研的結論或部分結論作為醫學論文的主題;②科研結果與開題時預測不一致,待查出原因后,再尋找主題;③科研達不到預期結果,可總結經驗,從反面挖掘主題。
2.2在科研過程中選題醫學科研的過程中,有時會出現意外的現象或問題,作者如果能夠細心觀察、及時發現,可以在這些偶然中獲得新的選題。
2.3在臨床實踐中選題臨床工作是醫學論文寫作取之不盡的源泉,作者在臨床中會經常遇到許多需要解決的實際應用問題或理論問題,對此,只要從本學科實際出發,用心思考,會從中產生很多好的主題。其包括:①探討發病機制與預后情況;②分析臨床癥狀與表現;③研究診斷方法和治療方法;④疾病的多因素分析等。
2.4從文獻資料中選題醫學文獻是人們長期積累的寶貴財富,是醫學論文選題的重要來源。閱讀最新文獻資料,可以了解當前醫學科學研究的進展情況,開拓思路、激發靈感,從而挖掘提煉出好的醫學論文主題。
3醫學論文的一般體裁
3.1實驗研究一般為病因、病理、生理、生化、藥理、生物、寄生蟲和流行病學等實驗研究。主要包括:①對各種動物進行藥理、毒理實驗,外科手術實驗;②對某種疾病的病原或病因的體外實驗;③某些藥物的抗癌、抗菌、抗寄生蟲實驗;④消毒、殺蟲和滅菌的實驗。
3.2臨床分析對臨床上某種疾病病例(百例以上為佳)的病因、臨床表現、分型、治療方法和療效觀察等進行分析、討論,總結經驗教訓,并提出新建議、新見解,以提高臨床療效。
3.3療效觀察指使用某種新藥、新療法治療某種疾病,對治療的方法、效果、劑量、療程及不良反應等進行觀察、研究,或設立對照組對新舊藥物或療法的療效進行比較,對比療效的高低、療法的優劣、不良反應的種類及程度,并對是否適于推廣應用提出評價意見。
3.4病例報告主要報告罕見病及疑難重癥;雖然曾有少數類似報道但尚有重復驗證或加深認識的必要。
3.5病例(理)討論臨床病例討論主要是對某些疑難、復雜、易于誤診誤治的病例,在診斷和治療方面進行集體討論,以求得正確的診斷和有效的治療。臨床病理討論則以對少見或疑難疾病的病理檢查、診斷及相關討論為主。
3.6調查報告在一定范圍的人群里,不施加人工處理因素,對某一疾病(傳染病、流行病、職業病、地方病等)的發病情況、發病因素、病理、防治方法及其效果進行流行病學調查研究,給予評價,并對防治方案等提出建議。
關鍵詞:醫學教育研究;文獻分析;合作度;參考文獻
《中華醫學教育雜志》是醫學教育專業研究領域最重要的交流平臺和信息來源[1]。在1994年,作者曾對該刊(當時為《醫學教育》)1986~1992年83期發表的全部論文的論文作者合作度、論文作者單位合作度進行了統計與分析[2]。時隔25年(1986~2010),《醫學教育》雜志已經更名為《中華醫學教育雜志》,近年更是進入到中文核心期刊范疇[3]。為了反映期刊論文作者合作度在新形勢下出現了哪些變化,本文對《中華醫學教育雜志》2008~2010年3卷18期雜志的論文作者合作度再次進行統計分析,并與25年前資料進行對比。
1資料與方法
1.1一般資料 為《中華醫學教育雜志》2008,2009,2010共3卷18期雜志全部論文。
1.2統計方法 對統計對象以篇為單位分別逐條統計,包括各期雜志論文篇數、每篇論文的作者數以及涉及的作者單位,最后求出論文作者合作度以及論文作者單位合作度。再與既往資料對比分析。
2結果
參見表1、表2、表3。另統計了《中華醫學教育雜志》論文作者涉獵的學科以及分類,按照來源期刊可分為7個類別:醫學教育、醫學專業期刊、普通教育學、醫學院校學報、普通大專院校學報、科學技術類和社會科學經濟文學類等。
3討論
3.1論文作者署名人數構成以及論文作者單位數量構成均較25年前發生了明顯變化:2008~2010年度《中華醫學教育雜志》論文作者署名人數主要集中在2~5位,單一作者發表的論文由61.46%改變為11.29%;而論文作者單位數量構成也由單一單位占94.94%降低為61.09%,而由2~3個單位間合作的論文數量由4.83%大幅增加到34.16%。
3.2論文作者合作度與論文作者單位合作度明顯提高,論文作者合作度由1.69改變為3.81;論文作者單位合作度也由1.06增加到1.61。
3.3《中華醫學教育雜志》論文作者合作度增加的意義 根據論文作者署名人數構成的變化(單一作者數量比例的大幅下降),論文作者單位數量構成發生的變化(多單位合作的論文數量大幅增加),結合論文作者合作度與論文作者單位合作度均較25年前明顯提高的結果,反映了近年醫學教育工作者的研究廣度在明顯增加。醫學教育工作者研究廣度的增加,必然會有深度的體現。醫學教育是教育學與醫學兩大體系的綜合體,醫學專業的特殊性與教育學的普遍性如何結合,是需要醫學教育工作者不斷去體會與努力地。
3.4醫學教育工作者在掌握本專業知識的同時,需要不斷地擴大知識面、涉獵面要廣 在提供參考文獻的773種中文雜志中,共提供中文參考文獻3596條,其中19種醫學教育專業期刊共提供引文條數1476條,即2.46 9%(19/773)的醫學教育專業期刊提供了41.05%(1476/3596)的中文參考文獻。其次為醫學專業期刊與普通教育學期刊,分別提供26.06%與16.18^%的中文參考文獻,但兩者涉及到的期刊種類分別達到270種與132種。由此可見,醫學教育工作者除了專業知識以外,尚需掌握醫學教育學的相關知識,同時也需要熟悉普通教育學知識,了解社會科學知識、科普知識。
參考文獻:
[1]李曉霞,耿民建,甘業華,等.《中華醫學教育雜志》2002年至2006年載文被引分析[J].中華醫學教育雜志,2008,28(4):126-128.
[2]張東海,田華.醫學教育研究的廣度與深度亟待增強--《醫學教育》雜志論文作者合作度分析[J].中國科學技術出版社,1994:430-432.
[3]《中華醫學教育雜志》編輯部.中華醫學教育雜志》入選"中國科技論文統計源期刊"[J].中華醫學教育雜志,2010,30(6):853.
[4]李曉霞,耿民建,甘業華.《中華醫學教育雜志》不同時期狀況的比較分析[J].中華醫學教育雜志,2009,29(5):59-62.