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H5N1亞型流感病毒M2與NA基因真核表達載體的構(gòu)建與鑒定
郭建強; 姚立紅; 陳愛珺; 劉曉宇; 付金奇; 徐鵬衛(wèi); 張智清 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所; 病毒基因工程國家重點實驗室; 北京100052
- 流感病毒a型
- 病毒蛋白質(zhì)類
- 神經(jīng)氨酸酶
- 表達的序列標記
摘要：目的 構(gòu)建表達H5N1亞型流感病毒M2和NA基因的多種真核表達載體.方法 以我國分離的首株人H5N1亞型禽流感病毒（A/Anhui/1/2005）作為研究對象,PCR擴增全長M2與NA基因.將M2基因克隆入真核表達載體pStar的IRES上游或下游的MCS,構(gòu)建重組pStar-M2/和pStar-/M2.將NA基因克隆人pStar載體IRES上游或下游的MCS,構(gòu)建重組pStar-NA/和pStar-/NA.將M2和NA基因先后克隆到pStar載體IRES序列的上游和下游MCS,分別構(gòu)建雙基因共表達重組pStar-M2/NA和pStar-NA/M2.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293細胞,使用IFA方法 檢測各重組質(zhì)粒相應(yīng)外源基因的表達.結(jié)果 通過酶切鑒定,各重組質(zhì)粒構(gòu)建正確.將其轉(zhuǎn)染293細胞后,使用IFA方法 檢測到了各重組質(zhì)粒中相應(yīng)外源基因的表達.結(jié)論 構(gòu)建了多種表達H5NI亞型流感病毒M2和（或）NA基因的真核表達載體,為研究開發(fā)流感DNA疫苗奠定了基礎(chǔ).
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