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山羊痘病毒059蛋白表達及鑒定

米麗開姆·托合提尼亞孜; 張雪萍; 何川川; 童劍軍; 楊倩; 李有文 塔里木大學動物科學學院; 新疆阿拉爾843300; 新疆生產建設兵團塔里木畜牧科技重點實驗室; 新疆阿拉爾843300; 塔里木大學生命科學學院; 新疆阿拉爾843300
  • 羊痘病毒
  • 059
  • 基因
  • 克隆
  • 原核表達

摘要:為研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技術擴增山羊痘病毒THX株059基因,并構建了融合表達His標簽的原核表達載體,測序鑒定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推測的氨基酸序列結構特征,將重組質粒轉化大腸桿菌BL21,經IPTG誘導表達,用SDS-PAGE和Western-blot鑒定其蛋白表達情況。結果成功擴增并構建了山羊痘病毒059基因的原核表達載體PET-42b-059,THX株059基因全長為765bp,與參考株的相似性高達99.34%,與山羊痘病毒在親緣關系上較近,而與疙瘩皮膚病病毒與綿羊痘病毒的親緣關系較遠。059蛋白會長255aa,由多個α螺旋和β片層交錯構成,分子量大小為29KDa,SDS-PAGE結果顯示其以包涵體的形式表達,大小與理論相符,WesternBlot結果證明059蛋白與His標簽進行了融合表達。結果表明059蛋白可以較好原核表達,為進一步研究該蛋白的其他生物學特性奠定了基礎。

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