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野杏SSR-PCR反應體系優化

董勝君; 夏澤臻; 盧彩云; 劉明國; 吳月亮; 陳建華 沈陽農業大學林學院; 遼寧沈陽110866
  • 野杏
  • 反應體系
  • 優化

摘要:為建立穩定可靠的野杏SSR-PCR反應體系,以3個野杏無性系170號、240號、263號和1個西伯利亞杏無性系508號為試驗材料,采用L16(45)正交試驗設計對影響野杏SSR-PCR反應的5個因素在4個水平上進行優化。結果表明:各因素對反應體系的影響由大到小依次為DNA模板濃度、引物、dNTP、Mg^2+、Taq聚合酶。野杏SSR-PCR最佳反應體系(總體積20μL):dNTPs0.45mmol/L、Mg^2+2mmol/L、Taq酶1.125U、引物0.125μmol/L、DNA模板20ng。選用引物X128和60個野杏樣木對該體系進行穩定性驗證,擴增產物集中在100~200bp,穩定度高,多態性良好,該體系可應用于野杏分子標記輔助育種等方面的研究中。

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