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刺葡萄愈傷組織UFGT基因克隆及表達分析

賴呈純; 潘紅; 黃賢貴; 范麗華; 賴鐘雄; 段長青; 劉文慧 福建省農業科學院農業工程技術研究所; 福建福州350003; 福建省農產品(食品)加工重點實驗室; 福建福州350003; 福建農林大學園藝植物生物工程研究所; 福建福州350002; 中國農業大學食品科學與營養工程學院; 北京100083; 北京匯源食品飲料有限公司; 北京101305
  • 刺葡萄
  • 愈傷組織
  • 基因克隆
  • 基因表達

摘要:為從細胞水平上揭示刺葡萄3-O-類黃酮葡萄糖基轉移酶(UFGT)基因調控花青素合成的功能,以刺葡萄愈傷組織為試驗材料,根據刺葡萄愈傷組織轉錄組UFGT序列片段,利用RT-PCR結合RACE技術克隆得到VdUFGT基因,并對其進行生物信息學和表達特性分析。結果表明,VdUFGT基因cDNA和DNA開放閱讀框(ORF)分別為1 371 bp和1 448 bp,包含2個外顯子和1個內含子,編碼456個氨基酸,為帶負電荷的不穩定的親水性蛋白,具有一個UDPGT結構域,是UDPGT超家族成員,包含UDP-黃酮糖基轉移酶特征區域。由UFGT同源基因編碼蛋白所構建的系統發育樹,與植物進化的關系相一致,6個葡萄屬植物聚為一支。RT-qPCR分析表明,刺葡萄紅色愈傷組織VdUFGT轉錄水平極顯著高于白色愈傷組織,培養25 d的2個細胞培養物差異可達79倍;在刺葡萄愈傷組織連續培養過程中,紅色愈傷組織中Vd UFGT轉錄水平變化幅度較大,在愈傷組織快速生長中期和衰老初期分別出現峰值,而刺葡萄白色愈傷組織VdUFGT轉錄水平與紅色愈傷組織相比變化幅度不大,且始終維持在一個較低的水平。說明VdUFGT對刺葡萄紅色愈傷組織細胞培養物中的花青素生物合成有重要的調控作用,這種調控作用主要發生在刺葡萄愈傷組織細胞快速生長中期和細胞衰老初期。本研究結果為進一步闡明VdUFGT調控刺葡萄細胞花青素合成的機制奠定了理論基礎。

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