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蛋白質非酶糖基化終產物對足細胞自噬與凋亡的影響

陳結慧; 祝勝郎; 葉玲; 朱恒梅; 蔣瑩; 李就鴻 深圳市第六人民醫院腎內科; 廣東深圳5108052
  • 足細胞
  • 自噬
  • 凋亡
  • 糖尿病腎病

摘要:目的:探討蛋白質非酶糖基化終產物(AGEs)作用下人足細胞自噬和凋亡發生情況及可能的信號轉導通路。方法:體外培養永生化人足細胞,以AGEs 100 mg/L分別不同時間(0、4、8、12、24 h)刺激足細胞。Western blotting檢測足細胞自噬標記性蛋白微管相關蛋白1B輕鏈3-II/I(LC3-II/I)、自噬相關基因Atg5、哺乳動物雷帕霉素靶點受體(m TOR)信號通路相關蛋白p70 S6激酶1(p-p70 S6 Kinase,p70 S6Kinase)表達水平;熒光顯微鏡觀察自噬溶酶體形成標志蛋白溶酶體膜蛋白(LAMP2a);AnnexinⅤ/7-AAD雙染流式細胞術檢測足細胞早期和晚期凋亡。結果:(1)與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足細胞LC3BII/I表達水平在4、8、12、24 h均明顯下降(P〈0.05);Atg5蛋白表達水平在8、12、24 h均明顯下降(P〈0.05),在12 h下降達到最高峰;p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高(P〈0.05),在12 h達峰,在24 h再次下降;(2)免疫熒光染色結果顯示,與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激足細胞12 h LAMP2a表達明顯減少;(3)與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足細胞發生早期凋亡+晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐漸增加(P〈0.05),在12 h達峰(14.07%)。結論:AGEs刺激下人足細胞自噬減少,凋亡增加,伴隨著m TOR/p70S6 Kinase信號通路激活。AGEs可能通過m TOR/p70 S6 Kinase信號通路途徑調節足細胞自噬與凋亡,從而導致足細胞損傷。

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